Lorsqu’on consulte un certificat d’analyse (COA) pour un peptide de recherche, deux méthodes d’analyse apparaissent fréquemment : la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) et la spectrométrie de masse (MS).
Ces deux analyses fournissent des renseignements importants, mais elles ne mesurent pas la même chose. Comprendre cette différence permet de mieux interpréter les résultats présentés sur un certificat d’analyse.
Qu’est-ce que l’analyse HPLC?
La chromatographie liquide à haute performance, communément appelée HPLC, est une méthode utilisée pour séparer les différents composants présents dans un échantillon.
Dans le contexte des peptides de recherche, l’HPLC est principalement utilisée pour évaluer la pureté chromatographique de l’échantillon.
Pendant l’analyse, les composants de l’échantillon sont séparés et détectés à différents moments. Les résultats sont généralement représentés sous forme de chromatogramme comportant plusieurs pics.
Le pic principal représente normalement le composé dominant dans l’échantillon, tandis que les petits pics peuvent représenter des impuretés ou d’autres composants détectés.
Un résultat HPLC exprimé en pourcentage indique donc la proportion relative du signal chromatographique attribuée au composé principal.
Que signifie une pureté HPLC de 99 %?
Si un certificat d’analyse indique une pureté HPLC de 99 %, cela signifie qu’environ 99 % du signal chromatographique mesuré correspond au pic principal.
Cependant, il est important de comprendre qu’un résultat HPLC élevé ne confirme pas, à lui seul, l’identité moléculaire du composé.
C’est précisément pour cette raison que la spectrométrie de masse est souvent utilisée en complément.
Qu’est-ce que la spectrométrie de masse?
La spectrométrie de masse (MS) est une technique analytique utilisée pour mesurer le rapport masse/charge des molécules présentes dans un échantillon.
Pour l’analyse des peptides, elle permet notamment de comparer la masse moléculaire détectée avec la masse moléculaire attendue du peptide recherché.
Lorsque les valeurs correspondent, le résultat fournit un élément important permettant de confirmer l’identité du composé.
Autrement dit :
HPLC → évalue principalement la pureté chromatographique
Spectrométrie de masse → aide à confirmer l’identité moléculaire
Pourquoi utiliser les deux méthodes?
Un résultat de pureté élevé est beaucoup plus informatif lorsqu’il est accompagné d’une méthode permettant également de vérifier l’identité du composé.
Par exemple, un échantillon pourrait produire un pic chromatographique dominant et afficher une pureté HPLC élevée. Cependant, sans analyse supplémentaire, ce résultat ne permet pas nécessairement de confirmer que le composé principal est bien le peptide attendu.
La spectrométrie de masse fournit donc une autre donnée importante en comparant la masse détectée à celle attendue.
Ensemble, les deux méthodes offrent une image analytique plus complète de l’échantillon.
Que rechercher sur un certificat d’analyse?
Lors de l’examen d’un COA de peptide de recherche, plusieurs éléments peuvent être utiles :
- le nom du composé analysé;
- le numéro de lot ou l’identification de l’échantillon;
- le résultat de pureté HPLC;
- le chromatogramme HPLC;
- les résultats de spectrométrie de masse;
- la masse moléculaire attendue et détectée;
- la date de l’analyse;
- l’identité du laboratoire ayant effectué les analyses.
Ces renseignements permettent de mieux comprendre comment l’échantillon a été évalué.
Pourquoi les analyses indépendantes sont importantes
Les analyses effectuées par un laboratoire tiers indépendant ajoutent une étape de vérification entre le fournisseur et les résultats analytiques présentés au chercheur.
Chez Recherche Logistique, les certificats d’analyse disponibles pour nos produits proviennent d’analyses indépendantes et sont associés aux lots correspondants lorsque disponibles.
Notre objectif est de rendre ces renseignements facilement accessibles afin que les chercheurs puissent examiner les résultats analytiques associés aux matériaux qu’ils commandent.
HPLC et spectrométrie de masse : deux mesures différentes
Il est facile de confondre pureté et identité lorsqu’on consulte un COA.
La distinction essentielle est simple :
L’HPLC permet principalement d’évaluer la pureté chromatographique d’un échantillon.
La spectrométrie de masse permet de vérifier si la masse moléculaire détectée correspond à celle attendue pour le composé.
Lorsqu’elles sont utilisées ensemble, ces méthodes fournissent des renseignements complémentaires permettant une évaluation plus complète d’un peptide de recherche.
À des fins de recherche en laboratoire uniquement. Non destiné à la consommation humaine ou à un usage thérapeutique.
